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高效液相色谱仪测定食品中喹啉铜残留量
发布时间:2019-11-27 08:43  | 作者: admin  | 来源: 未知
高效液相色谱仪测定食品中喹啉铜残留量



一、原理
试样中残留的喹啉铜,用1% 草酸溶液提取,亲水亲脂平衡的水可浸润性的反相固相萃取柱净化,,1%草酸水溶液复溶,用带有紫外检测器的高效液相色谱仪测定,外标法定量。
 
二、试剂与材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和符合 GB / T6682 规定的一级水.
 
2.1  试剂
 
2.1.1   草酸:分析纯。
 
2.1.2    甲醇:色谱纯。
 
2.2  溶液配制
 
2.2.1   草酸溶液( 10g / L ):称取 10g 草酸加水溶解,用水定容至 1L .
 
2.2.2   氢氧化钠溶液( 1mol/ L ):称取 4g 氢氧化钠,用水溶解并稀释至 100mL .
 
2.2.3   淋洗液:甲醇- 水溶液(1+9 ,体积比):量取100mL 甲醇,加入到900mL 水中, 混匀.
 
2.2.4   洗脱液:草酸甲醇溶液( 10g / L ),称取1g草酸,用 100mL 甲醇溶解,混匀.
 
2.2.5   流动相 A :称取1.26g 草酸,用水溶解并定容至1L ,过0.22μm 有机滤膜,现用现配.
 
2.3  标准品:喹啉铜:纯度 ≥98% .
 
2.4  标准溶液配制
 
2.4.1   喹啉铜标准储备溶液(100mg / L ):称取10mg (精确至0.1mg )喹啉铜标准品于100mL 聚丙烯容量瓶中,用甲醇溶解后定容,作为标准储备溶液, -18℃ 以下保存,有效期6个月.
 
2.4.2   喹啉铜标准工作溶液(10mg / L ):吸取10mL (精确至0.1mL )喹啉铜标准储备溶液于100mL 聚丙烯容量瓶中,用甲醇定容,配制成标准工作溶液,0℃~5℃ 保存,有效期 1 个月.
 
2.5  材料
 
2.5.1   有机滤膜: 0.22 μm .
 
2.5.2   聚乙烯筛板: 20 μ m , 13mm ,或者相当规格的滤膜.
 
2.5.3   亲水亲脂平衡的水可浸润性的反相固相萃取柱( HLB 固相萃取柱): 200mg , 6mL ,或相当者.
 
2.5.4   精密pH 试纸:pH2.7~4.7 .
 
三、仪器和设备
3.1   高效液相色谱仪:配有紫外检测器或者二极管阵列检测器.
 
3.2   分析天平:感量 0.1mg 和感量0.01g .
 
3.3   容量瓶: 1L .
 
3.4   聚丙烯广口瓶: 250mL .
 
3.5   聚丙烯容量瓶: 100mL .
 
3.6   聚丙烯试管: 10mL .
 
3.7   聚丙烯离心管: 150mL .
 
3.8   振荡仪.
 
3.9   离心机: ≥5000r / min .
 
3.10   氮吹仪.
 
3.11   涡旋振荡合器.
 
3.12   固相萃取装置.
 
四、试样制备
蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量,样品取样部位按 GB2763 的规定执行.对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆.匀浆放入聚乙烯容器中.
 
取谷类样品 500g ,粉碎后使其全部可通过 425 μ m 的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中.取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各 500g ,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中.
 
植物油类样品搅拌均匀.试样于 -20℃~-16℃ 条件下保存.
 
五、分析步骤
5.1   提取
 
5.1.1   蔬菜、水果、植物油和食用菌
 
称取 10g (精确至0.01g )试样250mL 聚丙烯广口瓶中,加入90mL 草酸溶液,振荡提取1h ,转移至离心管, 4000r / min 离心5min ,上清液(植物油取水相层)转移至100mL 聚丙烯容量瓶,用草酸溶液定容至100mL ,准确移取10mL 提取液过聚乙烯筛板,然后用氢氧化钠溶液调节pH至3 ,待净化。
 
5.1.2   谷物、油料、坚果
 
称取5g (精确至0.01g )试样250mL 聚丙烯广口瓶中,准确加入100mL 草酸溶液,振荡提取1h ,转移至离心管,4000r / min 离心5min ,取10mL 上清液用氢氧化钠溶液调节pH至3 ,4000r / min 离心 5min ,取上清液过聚乙烯筛板,待净化。
 
5.1.3   茶叶和香辛料
 
称取5g 试样(精确至0.01g )于250mL 聚丙烯广口瓶中,准确加入100mL 草酸溶液,振荡提取1h ,转移至离心管,4000r / min 离心5min ,取10mL 上清液过聚乙烯筛板,用氢氧化钠溶液调节pH值至 3 ,待净化。
 
5.2   净化
 
HLB 固相萃取柱依次用5mL 甲醇和5mL 水活化,加入上述的待净化液,加入5mL 淋洗液,舍弃流出液,抽干固相萃取柱,再加3mL 洗脱液,收集洗脱液于10mL 聚丙烯试管中,置于50℃ 水浴中氮气吹至近干,准确加1mL 草酸溶液),涡旋1min 溶解残渣,过0.22μm 有机滤膜,供高效液相色谱仪测定。
 
注:全过程应避免接触玻璃器皿.
 
5.3   测定
 
5.3.1   高效液相色谱仪参考条件
 
a )色谱柱: C18 , 250mm×4.6mm (内径),粒径5μm ,或相当者;
 
b )色谱柱温度: 40℃ ;
 
c )检测波长: 252nm ;
 
d )进样体积: 20μL ;
 
e )流动相:甲醇和流动相A,流速及梯度洗脱程序见表 1 .
 
5.3.2   标准曲线的绘制
 
用草酸溶液将标准工作液逐级稀释得到质量浓度分别为0.05mg / L 、0.2mg / L 、 1mg / L 、 2mg/ L 和5mg / L 的标准工作溶液,质量浓度由低至高依次进样测定,以峰面积和质量浓度计算,得到标准曲线回归方程.标准溶液色谱图参见附录 A 中的图 A.1。
 
​5.3.3   测定
 
按照保留时间进行定性,样品与标准品保留时间的相对偏差不大于 2% .待测样液中喹啉铜的响应值应在标准曲线范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析,外标法定量.
 
六、结果计算
试料中的喹啉铜含量以质量分数 ω 计,单位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1 )计算.
 
​计算结果保留两位有效数字,当结果大于 1mg /kg时,保留 3 位有效数字。