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高效液相色谱仪测定11种三嗪类农药的含量
发布时间:2019-11-19 09:52  | 作者: admin  | 来源: 未知
高效液相色谱仪测定11种三嗪类农药的含量



一、方法原理
以丙酮-二氯甲烷为提取剂,用索氏提取或加压流体萃取法提取土壤或沉积物中的三嗪类农药,提取液经固相萃取净化、浓缩、定容后用高效液相色谱仪分离,紫外检测器检测,以保留时间定性,外标法定量。
 
二、试剂和材料
除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂。实验用水为新制备的超纯水或蒸馏水。
 
2.1 丙酮(C 3 H 6 O):农残级。
 
2.2 二氯甲烷(CH 2 Cl 2 ):农残级。
 
2.3 正己烷(C 6 H 14 ):农残级。
 
2.4 乙腈(C 2 H 3 N):液相色谱级。
 
2.5 丙酮-二氯甲烷混合溶剂:1+1。用丙酮和二氯甲烷按 1:1 体积比混合。
 
2.6 丙酮-正己烷混合溶剂:1+9。用丙酮和正己烷按 1:9 体积比混合。
 
2.7 三嗪类农药标准贮备液:ρ=1 000 mg/L。
 
可直接购买市售有证标准溶液,按照标准溶液证书要求进行保存,使用时应恢复至室温并摇匀。
 
2.8 三嗪类农药标准使用液:ρ=10.0~100 mg/L。
 
用乙腈稀释标准贮备液,配制成浓度为 10.0~100 mg/L 的标准使用液,于4℃以下避光、冷藏,保存时间为 60 d。
 
2.9 无水硫酸钠(Na 2 SO 4 )。
 
使用前置于马弗炉中 450℃烘烤 4 h,冷却后装入磨口玻璃瓶中密封,于干燥器中保存。
 
2.10 硅藻土:粒径 150~250 μm(100~60 目)。
 
使用前置于马弗炉中 450℃烘烤 4 h,冷却后装入磨口玻璃瓶中密封,于干燥器中保存。
 
2.11 石英砂:粒径 150~250 μm(100~60 目)。
 
使用前置于马弗炉中 450℃烘烤 4 h,冷却后装入磨口玻璃瓶中密封,于干燥器中保存。
 
2.12 固相萃取柱。
 
市售硅酸镁、硅胶、氨基或其他等效固相萃取柱,1 000 mg/6 ml 或更大容量规格。
 
2.13 玻璃棉或玻璃纤维滤膜。
 
使用前用丙酮-二氯甲烷混合溶剂浸洗,待溶剂挥发干后,置于磨口玻璃瓶中密封保存。
 
2.14 索氏提取套筒:玻璃纤维或天然纤维材质套筒。
 
玻璃纤维套筒使用前置于马弗炉中450℃烘烤4 h,冷却后置于磨口玻璃瓶中密封保存;天然纤维材质套筒使用前用丙酮-二氯甲烷混合溶剂浸洗,待溶剂挥发干后,置于磨口玻璃瓶中密封保存。
 
2.15 氮气:纯度≥99.99%。
 
三、仪器和设备
3.1 高效液相色谱仪:具有梯度洗脱功能,柱温箱温度可控,配备紫外检测器或二极管阵列检测器。
 
3.2 色谱柱:填料为十八烷基硅烷键合硅胶,粒径 5 μm,柱长 250 mm,内径 4.6 mm 的色谱柱或其他等效色谱柱。
 
3.3 提取装置:索氏提取装置或加压流体萃取仪。
 
3.4 浓缩装置:旋转蒸发仪、氮吹仪或其他同等性能的浓缩设备。
 
3.5 固相萃取装置。
 
6.6 冷冻干燥仪。
 
3.7 棕色玻璃瓶:250 ml。
 
3.8 一般实验室常用仪器和设备。
 
四、样品
4.1 样品采集和保存
 
按照 HJ/T 166 的相关规定进行土壤样品的采集和保存;按照 GB 17378.3、GB 17378.5、HJ 494、HJ 495 和 HJ/T 91 的相关规定进行沉积物样品的采集和保存。
 
样品应于洁净的棕色玻璃瓶中保存,运输过程中应避光、密封、冷藏。如暂不能分析,土壤样品应在 4℃以下冷藏、避光保存,保存时间为 5 d(其中西玛津、西草净、阿特拉津、仲丁通、扑灭津和去草净保存时间为 15 d);沉积物样品应冷冻、密封、避光保存,保存时间为 8 d。样品提取液(7.4.1)在 4℃以下冷藏、密封、避光保存,保存时间为60 d。
 
4.2 样品的制备
 
将样品置于不锈钢盘或聚四氟乙烯盘中,除去枝棒、叶片、石子等异物,混匀,并按照HJ/T 166 的要求进行样品缩分,可采用冷冻干燥或干燥剂两种方式脱水。
 
冷冻干燥法:取适量混匀后样品,放入冷冻干燥仪中干燥脱水。干燥后的样品需研磨、混匀。称取 10 g(精确到 0.01 g)样品进行提取。
 
干燥剂法:称取 10 g(精确到 0.01 g)新鲜样品,索氏提取法加入适量无水硫酸钠、加压流体萃取法加入适量硅藻土,研磨成流沙状,全部转移至提取装置中,待提取。
 
4.3 水分的测定
 
在称取提取样品时,另称取一份样品进行水分的测定。土壤干物质含量的测定按照 HJ613 的要求进行,沉积物含水率的测定按照 GB 17378.5 的要求进行。
 
4.4 试样的制备
 
4.4.1 提取
 
以丙酮-二氯甲烷混合溶剂为提取剂,用索氏提取法或加压流体萃取法提取。
 
索氏提取法:将全部样品小心转入索氏提取套筒内,将套筒置于索氏提取器回流管中,在底瓶中加入 200 ml 丙酮-二氯甲烷混合溶剂回流提取 24 h,回流速度控制在 3~4 次/h,收集提取液。
 
加压流体萃取法:按照 HJ 783 进行样品装填,静态萃取 3 次后收集提取液。萃取参考条件:载气压力 0.8 MPa、加热温度 100℃、萃取压力 1.034×10 7 Pa(1500 psi)、预加热平衡 5 min、静态萃取 5 min、溶剂淋洗 60%池体积、氮气吹扫 60 s。
 
注:若经过验证也可使用其他等效提取方法。
 
4.4.2 过滤和脱水
 
在玻璃漏斗内垫一层玻璃棉或玻璃纤维滤膜,加上适量无水硫酸钠,将提取液过滤到浓缩容器中。再用 2~3 ml 丙酮-二氯甲烷混合溶剂洗涤提取容器并冲洗漏斗,一并收集到浓缩容器中。
 
4.4.3 浓缩
 
将提取液浓缩至约 0.5 ml,加入约 5 ml 正己烷并浓缩至约 1 ml,将溶剂完全转换为正己烷,待净化。
 
4.4.4 净化
 
将固相萃取柱固定在固相萃取装置上。依次用 5 ml 丙酮和 10 ml正己烷活化萃取柱,保持柱头浸润。在溶剂流干之前,将浓缩后的约 1 ml 提取液转入柱内,开始收集流出液,用 3 ml 正己烷分 3 次洗涤浓缩容器,洗液全部移入柱内,用 10 ml 丙酮-正己烷混合溶剂进行洗脱,收集全部洗脱液。
 
4.4.5 浓缩定容
 
将净化后的洗脱液浓缩至约 0.5 ml,加入约 3 ml 乙腈,再浓缩至约 0.5 ml,将溶剂完全转换为乙腈,并用乙腈定容至 1.0 ml 待高效液相色谱仪测定。
 
五、分析步骤
5.1 仪器参考条件
 
流动相:A 为水,B 为乙腈,梯度洗脱参考程序见表 1;
流速:1.0 ml/min;
 
柱温:30℃;
 
进样量:10 μl;
 
检测波长:222 nm,辅助定性波长:231 nm。
 
5.2 标准曲线的建立
 
取一定量三嗪类农药标准使用液,用乙腈稀释,配制至少 5 个浓度点的标准系列,目标化合物质量浓度分别为 1.00 mg/L、10.0 mg/L、25.0 mg/L、50.0 mg/L、100 mg/L,贮存于棕色进样瓶中,待测。按照仪器参考条件,从低浓度到高浓度依次进样分析,以标准系列溶液中目标化合物浓度为横坐标,以其对应峰面积(峰高)为纵坐标,建立标准曲线。
 
5.3 标准样品色谱图
 
图 1 为 11 种三嗪类农药参考色谱图。
 
1—西玛津;2—莠去通;3—西草净;4—阿特拉津;5—仲丁通;6—扑灭通;
 
7—莠灭净;8—扑灭津;9—特丁津;10—扑草净;11—去草净
 
图 1 11 种三嗪类农药标准样品参考色谱图(ρ=5.00 mg/L)
 
5.4 试样测定
 
按照与标准曲线相同仪器条件进行试样的测定。若试样中目标化合物浓度超出标准曲线范围,样品需要重新提取,分取适量提取液后按步骤 7.4.2~7.4.5 重新处理后测定。
 
六、结果计算与表示
6.1 定性分析
 
以目标化合物的保留时间定性,必要时可采用标准样品加入法、不同波长下的吸收比、紫外光谱图扫描等方法辅助定性。
 
6.2 结果计算
 
土壤样品中三嗪类农药的质量浓度按式(1)计算:
 
式中:w i ——样品中目标化合物 i 的质量浓度,mg/kg;
 
ρ i ——由标准曲线所得试样中目标化合物 i 的质量浓度,mg/L;
 
V i ——试样定容体积,ml;
 
m i ——样品量,g;
 
w dm ——样品的干物质含量,%;
 
V 0 ——总提取液体积,ml;
 
V——分析时所用提取液体积,ml。
 
沉积物样品中三嗪类农药的质量浓度按式(2)计算:
 
​式中:w j ——样品中目标化合物 j 的质量浓度,mg/kg;
 
ρ j ——由标准曲线所得试样中目标化合物 j 的质量浓度,mg/L;
 
V j ——试样定容体积,ml;
 
m j ——样品量,g;
 
w H 2 O ——样品的含水率,%;
 
V 0 ——总提取液体积,ml;
 
V——分析时所用提取液体积,ml。
 
6.3 结果表示
 
测定结果小数点后位数的保留与方法检出限一致,最多保留 3 位有效数字