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高效液相色谱仪检测发酵豆腐制品中的生物胺含
发布时间:2019-09-25 09:46  | 作者: admin  | 来源: 未知
高效液相色谱仪检测发酵豆腐制品中的生物胺含量



本文采用高效液相色谱仪同时检测发酵豆制品中10种生物胺(BAs)的含量,并测定一些发酵豆腐制品中的生物胺含量。
 
一、材料与仪器
1、试剂与样品 
 
标准品腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、色胺、 2- 苯乙胺、组胺、酪胺、胍基丁胺、苯甲酰氯、 庚胺, 纯度均在 97% 以上; 
 
5- 羟基色胺, 纯度 98%;
 
乙腈,色谱级;
 
纯净水;
 
其它试剂均为分析纯级。
 
臭豆腐干样品;白方、红方、青方腐乳。
 
2、仪器 
 
高效液相色谱仪配紫外检测器;
 
高速电动匀浆器;
 
大容量离心机。
 
二、试验方法
1、标准溶液的配制
 
各标准品用 0.1 mol/L HCl 溶液配制成质量浓度为 1 mg/mL 的储备液,分别取相同体积的10种生物胺储备液(腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、色胺、2- 苯乙胺、组胺、 5- 羟基色胺、酪胺和胍基丁胺),混匀得到质量浓度为 100 μg/mL 的混合标准品工作液。 
 
1 mg/mL 内标庚胺储备液用 0.1 mol/L HCl溶液稀释成质量浓度为 100 μg/mL 的内标工作液。 所有溶液均避光保存于 4 ℃ 冰箱中。
 
2、标准曲线的制作
 
100 μg/mL生物胺混合标准品工作液用 0.1mol/L HCl溶液稀释至 80 、 50 、 20 、 10 、 5 、 1 、 0.5 、 0.1μg/mL。 
 
衍生过程的具体方法是:分别取 2 mL不同浓度的稀释液, 同时添加 100 μL 100 μg/mL内标工作液, 1 mL 2 mol/L NaOH , 10 μL 苯甲酰氯,然后旋涡振荡 30 s ,在 30 ℃ 水浴条件下反应40 min ,反应 20 min 时取出并漩涡振荡 30 s 。
 
 反应结束后加 2 mL 饱和 NaCl 溶液终止反应。 然后加入 3 mL 乙醚萃取, 1 000×g 离心 10 min , 移取乙醚层, 重复此萃取过程。 乙醚层合并于规格为10 mL 的离心管中,氮气吹干,然后用 1 mL 乙腈(色谱级)溶解, 0.45 μm 偏氟膜过滤,待测。 每个样品做 3 个平行。 样品避光保存于 4 ℃ 冰箱中,24 h 内完成检测。
 
3、样品的前处理
 
将样品用研钵研磨均匀,称取 5.0 g 置于 50mL 离心管中,加 250 μL 内标( 1 000 μg/mL 庚胺储备液),再加 20 mL 0.4 mol/L 高氯酸溶液分散,均质 1 min ,振荡提取 5 min ,静置 5 min ,然后5000×g 离心 35 min ; 将上清液移入 50 mL 容量瓶中,用 20 mL 高氯酸溶液重复提取 1 次,上清液合并至相应容量瓶中,用 0.4 mol/L 高氯酸溶液定容至刻度;取 2 mL 该溶液,按标准品的衍生方法处理。 本试验中对每个样品的处理均重复 3 次。
 
4、色谱条件
 
色谱柱:ODS-3 250 mm×4.6 mm , 5μm ; 
 
柱温: 30 ℃ ; 
 
流动相 A : 0.01 mol/L 乙酸铵溶液;
 
流动相 B :乙腈;
 
流动相梯度洗脱方法见表 1 ;
进样量: 20 μL ;
 
紫外检测波长: 254 nm ;
 
色谱工作站。